前言
支氣管哮喘(bronchial asthma)，簡稱哮喘，是由于某些過敏因素（如吸入花粉、工業(yè)粉塵、進(jìn)食魚蝦等）及植物性神經(jīng)功能紊亂引起的以支氣管阻塞為特點(diǎn)的疾病。哮喘的特征是陣發(fā)性帶有哮鳴音的呼吸困難、咳嗽、咳痰，呈反復(fù)發(fā)作。一般春、秋季節(jié)發(fā)病率較高，20％患者有本病的家族史。有關(guān)哮喘發(fā)病機(jī)制的探索、新治療方法的評價(jià)、新藥研究與開發(fā)都主要依賴于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。但是，動(dòng)物自發(fā)形成的變應(yīng)性哮喘很少，因此，成功復(fù)制支氣管哮喘的動(dòng)物模型是研究支氣管哮喘反復(fù)難愈的關(guān)鍵。
部分造模方法
使用動(dòng)物：豚鼠
【造模機(jī)制】：
甲苯二異氰酸甲酯(toluene diisocyanate, TDI)屬于低分子量化學(xué)物質(zhì)，對機(jī)體只有半抗原特性。TDI在高濃度情況下具有明顯的黏膜刺激及腐蝕作用，當(dāng)動(dòng)物接觸1.5ppm的TDI一個(gè)月或數(shù)月，可引起動(dòng)物的支氣管炎。經(jīng)證明TDI哮喘是lgE介導(dǎo)的速發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。
【造模方法】：
抗原制備用即刻制備的TDI/1，4-二氧六環(huán)液于冰浴下磁力攪拌器上逐滴加于1%牛血清清蛋白(bovine serum albumi，BSA)碳酸氫鈉中，調(diào)節(jié)該液pH為8.5。1小時(shí)后將該反應(yīng)液移入透析袋，置通風(fēng)櫥中過夜，使二氧六環(huán)揮發(fā)，隨后在pH 7.4的磷酸鹽緩沖液(PBS)中徹底透析6次，紫外分光光度計(jì)245nm處測吸收峰。用制備成的抗原加卡介苗、弗氏不完全佐劑混合、乳缽研磨成油包水乳劑備用。
動(dòng)物免疫選用白色短毛豚鼠，體重250~300g。分別用0.5ml甲苯二異氰酸甲酷牛血清清蛋白結(jié)合抗原(TDI-BSA)／弗氏完全佐劑(CFA)及TDI-BSA/氫氧化鋁(AHG)給動(dòng)物腹腔內(nèi)注射。免疫動(dòng)物于3周后再加強(qiáng)免疫1~2次?？乖思ぐl(fā)實(shí)驗(yàn)初次免疫5~8周后進(jìn)行，抗原吸入激發(fā)試驗(yàn)，先給以單純?nèi)搜迩宓鞍?human serum albumin, HSA)激發(fā)，無反應(yīng)后再吸入TDI-HSA。霧化吸入濃度為1mg/ml的TDI-HSA后有30.8％的動(dòng)物出現(xiàn)明顯哮喘反應(yīng)。
【造模特點(diǎn)】：
經(jīng)TDl-HSA激發(fā)后，動(dòng)物呼吸頻率增快，呼吸幅度增大，哮喘發(fā)作時(shí)伴咳嗽、躁動(dòng)不安，甚至痙攣性呼吸。87.5％的TDI-BSA/CFA致敏動(dòng)物以及40％的TDI-BSA/AHG致敏動(dòng)物可同時(shí)出現(xiàn)不同滴度的抗原特異性IgE及l(fā)gG型抗體。
【模型評估和應(yīng)用】：
TDI是重要的職業(yè)性致喘物之一。TDI作業(yè)者中約有5％～10％的人可發(fā)生職業(yè)性哮喘。此模型的建立為進(jìn)一步探討TDI哮喘的免疫學(xué)機(jī)制提供了條件，可用于TDI引起的職業(yè)性哮喘發(fā)生、發(fā)展及其藥物防治的研究。
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