前言
淋巴瘤(lymphoma)是發(fā)生于淋巴結(jié)及（或）淋巴結(jié)外淋巴組織的惡性腫瘤，是一類包含多種不同臨床表現(xiàn)和分子生物學(xué)特征的腫瘤。近年來(lái)，隨著艾滋病及繼發(fā)性免疫抑制疾病的增多，其發(fā)病率在世界各國(guó)明顯上升，但其基礎(chǔ)和臨床研究深度和廣度仍很有限。近年來(lái)，人們相繼建立各種淋巴瘤動(dòng)物模型，從自發(fā)性、誘發(fā)性腫瘤模型到廣泛運(yùn)用的移植性腫瘤模型以及運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)建立的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型等，這些模型為深入研究淋巴瘤病因、發(fā)病機(jī)制、診斷和治療等提供了有效的研究手段。
部分造模方法
使用動(dòng)物：小鼠
【造模機(jī)制】：
用已建立的淋巴瘤細(xì)胞株或患者淋巴瘤組織種植于免疫缺陷動(dòng)物體內(nèi)可建立移植性淋巴瘤模型，顯現(xiàn)該腫瘤的特性，是目前研究最多的腫瘤模型。目前，移植性淋巴瘤模型國(guó)內(nèi)外主要采用以下兩種移植方法：細(xì)胞種植法和組織塊移植法。
【造模方法】：
1.細(xì)胞種植法 人淋巴細(xì)胞(Raji)，1×106個(gè)/只，腹腔注射在5~6周雌性BALB/c-nu/nu小鼠，一般22天左右出現(xiàn)明顯的腹水。如果接種細(xì)胞數(shù)目增加，出現(xiàn)腹水的時(shí)間會(huì)縮短。此模型可連續(xù)傳代，在無(wú)菌情況下，取裸鼠移植瘤制成細(xì)胞懸液或腹水瘤細(xì)胞均可，離心后用原代細(xì)胞按以上方法接種，仍可形成腹水。
2.組織塊原位種植法 取人原發(fā)性結(jié)直腸惡性淋巴瘤原發(fā)灶和肝轉(zhuǎn)移灶術(shù)中新鮮瘤組織塊，對(duì)受體動(dòng)物實(shí)施麻醉，取腹正中線切口，辨認(rèn)結(jié)直腸，在漿膜面向腸壁內(nèi)做3mm切口深達(dá)黏膜層，以10.0無(wú)損傷縫合線經(jīng)切口將1mm3大小的瘤組織塊植人裸小鼠結(jié)直腸黏膜層內(nèi)，固定于腸壁黏膜層，關(guān)腹縫皮。然后進(jìn)行體內(nèi)原位器官篩選，取同一瘤源肝轉(zhuǎn)移灶1mm3瘤小塊移植另一只裸鼠結(jié)腸黏膜層，成瘤后的肝轉(zhuǎn)移灶移植裸鼠結(jié)腸黏膜層。在裸鼠體內(nèi)重復(fù)4次連續(xù)篩選。取肝轉(zhuǎn)移灶進(jìn)行裸鼠結(jié)腸移植，術(shù)后繼續(xù)飼養(yǎng)，觀察期為60~90天。當(dāng)荷瘤裸鼠處于瀕死狀態(tài)時(shí)，取其中1只荷瘤裸鼠用頸椎脫位術(shù)處死，系統(tǒng)解剖，取出移植瘤。一部分瘤組織以原代移植方法進(jìn)行鼠間連續(xù)傳代，每次傳代5~10只不等；另一部分瘤組織液氮凍存?zhèn)溆?，進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。其他荷瘤裸鼠飼養(yǎng)至瀕死狀態(tài)或自然死亡，以觀察其腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移。
【模型特點(diǎn)】：
1.細(xì)胞種植法 模型有腹水形成，多則10ml左右，鏡下可見(jiàn)大量瘤細(xì)胞，且腹腔內(nèi)有瘤塊，主要分布腸系膜，貼近腸壁處及淋巴結(jié)節(jié)，腸系膜增厚粘連極為明顯。瘤細(xì)胞大小一致，核染色深，核分裂多，密集排列間質(zhì)少，瘤結(jié)節(jié)壞死明顯，脾臟無(wú)明顯浸潤(rùn)，濾泡增生，生發(fā)中心明顯，巨核細(xì)胞多，肝、腎、肺未見(jiàn)瘤細(xì)胞浸潤(rùn)。染色體檢查顯示所有中期相多倍體中，著絲粒帶型與人染色體一致，為人類染色體特征。細(xì)胞接種方法常用腹腔或皮下注射，一般來(lái)說(shuō)，接種于皮下的模型，由于皮膚松弛，瘤結(jié)節(jié)可以較快生長(zhǎng)，相應(yīng)的宿主壽命較長(zhǎng)，便于研究和觀察。應(yīng)用成型的細(xì)胞系注射，可建立能夠連續(xù)傳代的B細(xì)胞淋巴瘤腹腔模型，成瘤率達(dá)100%。
2.組織塊原位種植法 這種類似人結(jié)腸惡性淋巴瘤病的高轉(zhuǎn)移模型移植瘤不僅在組織病理學(xué)、免疫組織化學(xué)表型、超微結(jié)構(gòu)、DNA倍體水平和染色體核型等方面與人源結(jié)直腸惡性淋巴瘤細(xì)胞相一致，而且腫瘤的移植生長(zhǎng)率和液氮凍存復(fù)蘇成活率均為100%。
【模型的評(píng)估和應(yīng)用】：
1.移植性腫瘤模型是篩選抗腫瘤新藥最常用的動(dòng)物模型。其優(yōu)點(diǎn)在于容易操作和施加干擾因素，動(dòng)物成瘤穩(wěn)定，成瘤率高，個(gè)體差異小，成瘤時(shí)間差異不大，且可以同種或同品系動(dòng)物中連續(xù)移植長(zhǎng)期保留供試驗(yàn)之用。但是，此類腫瘤生長(zhǎng)速度快，增殖比率高，體積倍增時(shí)間短，與人體腫瘤顯著不同。
2.自發(fā)性轉(zhuǎn)移模型是人癌轉(zhuǎn)移模型研究領(lǐng)域的難題，上述組織塊原位種植方法制備的轉(zhuǎn)移模型具有穩(wěn)定的生物學(xué)特性，為研究胃腸惡性淋巴瘤自發(fā)轉(zhuǎn)移提供了基本的實(shí)驗(yàn)材料；該法在深入研究直結(jié)腸惡性淋巴瘤的生物學(xué)特性、組織發(fā)生、病因病理、侵襲和轉(zhuǎn)移機(jī)制、實(shí)驗(yàn)治療等方面有不可取代的作用。
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