前言
角膜新生血管(ehoroidal neovascularization,CNV)常導(dǎo)致角膜透明度降低，是致盲的一個(gè)重要原因，也是角膜移植術(shù)后發(fā)生排斥反應(yīng)的高危因素。臨床上CNV治療仍是最棘手的問(wèn)題之一。CNV動(dòng)物模型屬于誘發(fā)性疾病動(dòng)物模型，通過(guò)物理方法（熱燒烙術(shù)和角膜縫線(xiàn)法等）、化學(xué)方法（堿性化學(xué)藥物燒傷等）、生物方法（角膜囊袋鑒定法）和手術(shù)方法（異種角膜移植、角膜基質(zhì)內(nèi)注射牛清蛋白、角膜基質(zhì)腫瘤組織植入術(shù)等）可人為地誘發(fā)動(dòng)物的角膜新生血管增生，產(chǎn)生類(lèi)似于人類(lèi)疾病的模型。下面主要介紹角膜新生血管研究最常用的方法——角膜囊袋鑒定法。常用的誘導(dǎo)劑有內(nèi)毒素、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、二氧化硅等，以緩釋內(nèi)毒素和bFGF緩釋藥丸誘生角膜新生血管動(dòng)物模型的制作為例，進(jìn)行簡(jiǎn)單介紹。
部分造模方法
使用動(dòng)物：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
【造模機(jī)制】：
內(nèi)毒素誘生的CNV繼發(fā)于炎癥反應(yīng)，并且炎癥刺激反應(yīng)與新生血管的誘生呈正相關(guān)，內(nèi)毒素誘生新生血管過(guò)程可能受巨噬細(xì)胞分泌的bFGF因子調(diào)控，并且被巨噬細(xì)胞分泌的其他因子如腫瘤壞死因子-α和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β放大。
bFGF是包含146個(gè)氨基酸具有復(fù)雜功能的單鏈膚，在一系列體外實(shí)驗(yàn)中，被證實(shí)具有對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞分化、增殖、遷移和趨化作用。bFGF誘導(dǎo)的微血管內(nèi)皮細(xì)胞可產(chǎn)生大量的µ-PA，在血管生成早期起中心作用，µ-PA將纖維蛋白溶酶原轉(zhuǎn)化成具有酶活性的纖維蛋白溶酶，后者又可激活膠原酶，溶解新生血管起始緣的基膜，并導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)入三維的膠原基質(zhì)，形成新的毛細(xì)血管芽。
【造模方法】：
緩釋內(nèi)毒素聚合物藥丸的制備：乙烯－醋酸－乙烯脂聚合物(Elvax)珠采用高純的己醛清洗至分光光度純，在室溫下將聚合物溶于二氯甲烷至10％(W/N)最終濃度，將一定比例E.Coli內(nèi)毒素與10％Elvax混合并強(qiáng)力攪拌至均勻懸液。內(nèi)毒素－Elvax懸液用消毒滴管滴入8孔玻璃板聚合，完全聚合后，制成1mm3大小，（1.3±0.3)mg/丸，紫外線(xiàn)消毒后-40℃儲(chǔ)藏備用。
bFBF緩釋藥丸的制備：bFBF緩釋藥丸由緩釋劑聚甲基丙烯酸－2－羥乙酯(Hydron)和一定量的誘導(dǎo)劑bFGF混合而成，在bFGF-Hydron緩釋藥丸中加入一定量的硫糖鋁(sucralfate)，制成Hydron包裹的bFGF-sucralfate緩釋藥丸，可有效地穩(wěn)定bFGF的生物活性，減緩bFGF的釋放。
角膜囊袋制作：所有手術(shù)步驟均在無(wú)菌條件下進(jìn)行，3％戊巴比妥鈉兔耳緣靜脈注射全身麻醉(25mg/kg), 1％地卡因局部點(diǎn)眼麻醉，在角膜中央作1.5mm、1/2角膜厚度切口，向6點(diǎn)位潛行分離1/2厚角膜囊袋，至距角膜緣2.0mm處，采用玻璃套管植入制備好的緩釋藥丸，將囊袋切口重新復(fù)位，以便愈合。
【模型特點(diǎn)】：
CNV與局部?jī)?nèi)毒素呈劑效依賴(lài)關(guān)系。用濃度為15％內(nèi)毒素聚合物能獲得顯著的角膜新生血管生長(zhǎng)，僅伴有輕微的角膜水腫，能誘生適宜的CNV動(dòng)物模型，內(nèi)毒素濃度過(guò)高則引起顯著的角膜炎癥，基質(zhì)混濁而且新生血管生長(zhǎng)易融合，影響新生血管測(cè)量和計(jì)算的準(zhǔn)確性，濃度太低則誘導(dǎo)力度過(guò)小，不適合模型的要求。
【模型評(píng)估和應(yīng)用】：
緩釋內(nèi)毒素聚合物藥丸誘生CNV模型的優(yōu)點(diǎn)是：新生血管定向成束生長(zhǎng)， 重復(fù)穩(wěn)定，測(cè)定和定量分析的準(zhǔn)確性明顯提高，并且可采用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行每日連續(xù)動(dòng)態(tài)定量測(cè)定，方便與對(duì)照組比較。
bFGF緩釋藥丸誘生的CNV動(dòng)物模型的優(yōu)點(diǎn)在于：bFGF作為新生血管的直接刺激因子，可排除炎癥等間接新生血管刺激因素，這對(duì)于特定的新生血管抑制劑的療效評(píng)價(jià)有重要意義；便于定量分析；穩(wěn)定性和重復(fù)性俱佳且經(jīng)濟(jì)實(shí)用。
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