前言
白內(nèi)障(cataract)是眼科的多發(fā)病和常見(jiàn)病，也是目前手術(shù)治療效果最好的疾病之一，如無(wú)合并其他疾病，術(shù)后視力能達(dá)到1.0以上。盡管如此，白內(nèi)障手術(shù)還面臨一些困難，例如植入的人工晶狀體通常沒(méi)有調(diào)節(jié)能力，或者只有一定范圍內(nèi)的有限調(diào)節(jié)能力，術(shù)后患者無(wú)法獲得滿意的全程視力；術(shù)后后發(fā)性白內(nèi)障導(dǎo)致患者視力下降甚至二次手術(shù)；手術(shù)存在的眼內(nèi)炎、視網(wǎng)膜脫離、繼發(fā)青光眼等并發(fā)癥，雖然發(fā)病率低，但嚴(yán)重威脅患者視力。以上種種使得白內(nèi)障的基礎(chǔ)研究仍然是眼科研究的熱點(diǎn)。目前，白內(nèi)障基礎(chǔ)研究主要可以分為先天性白內(nèi)障、老年性白內(nèi)障、繼發(fā)性白內(nèi)障以及后發(fā)性白內(nèi)降等。相應(yīng)的動(dòng)物模型也根據(jù)研究目的的不同分為遺傳性白內(nèi)障動(dòng)物模型、老年性白內(nèi)障動(dòng)物模型、代謝性白內(nèi)防動(dòng)物模型、物理因索致白內(nèi)陓動(dòng)物模型等。按照造模機(jī)制可分為自發(fā)性突變、誘發(fā)性突變和基因修飾模型。
部分造模方法
使用動(dòng)物：小鼠
【造模機(jī)制】：
貓、狗、兔等大中型動(dòng)物也可作為白內(nèi)障動(dòng)物模型，但是考慮到飼養(yǎng)和繁殖的方便，通常是采用大鼠或小鼠作為此類(lèi)動(dòng)物模型。常用的致突變劑ENU是一種烷化劑，屬致突變性致癌物?？芍苯幼饔糜贒NA后主要形成O6－乙基鳥(niǎo)嘌呤而導(dǎo)致堿基錯(cuò)配。其作用靶器官因動(dòng)物種屬及給藥途徑不同而有較大差異。小鼠經(jīng)ENU腹腔注射后，主要誘發(fā)腎、脾、肺等多種組織基因突變。
【造模方法】：
EUN磷酸鹽溶液溶解后注射于10~17周小鼠腹腔內(nèi)，分別是160mg/kg(pH 6.0，濃度66mM)，以及250mg/kg (pH 6.0，濃度30mM)，注射后雌雄鼠2: 1交配。合籠后用鑷子檢杳雌性小鼠陰道內(nèi)有無(wú)陰栓，查到陰栓鼠定為受孕第0天， 陰道栓為乳白色或淡黃色栓子，一般12~14小時(shí)后脫落。還可陰道涂片查精子，以查到精子者定為交配成功鼠，結(jié)果與陰道栓法一致率達(dá)90％以上，聯(lián)合使用可提高診斷準(zhǔn)確率。選取雄鼠腹腔注射藥物42天后受孕生產(chǎn)的鼠仔（子一代，F(xiàn)1)行白內(nèi)障篩選。在此基礎(chǔ)上可利用篩選出的白內(nèi)障子一代雌雄鼠交配建立遺傳性白內(nèi)障鼠模型。
已經(jīng)報(bào)道的應(yīng)用該法得到的轉(zhuǎn)基因白內(nèi)障動(dòng)物種類(lèi)繁多，按照位置和功能可分為晶狀體膜相關(guān)基因、晶狀體蛋白相關(guān)基因、細(xì)胞骨架蛋白基因以及熱休克蛋白和生長(zhǎng)因子蛋白基因等。白內(nèi)障生長(zhǎng)發(fā)育以及功能維持牽涉很多基因和蛋白，任何環(huán)節(jié)的改變都會(huì)導(dǎo)致白內(nèi)障的發(fā)生，采用基因工程生成的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物不僅有助于明確相關(guān)的白內(nèi)障相關(guān)基因，還有助于我們深刻理解其在晶狀體發(fā)育和功能維持上的作用。
【模型特點(diǎn)】：
誘發(fā)突變所得到的白內(nèi)障模型具有不確定性，表型多樣，發(fā)病年齡各異，遺傳背景不清。
【模型評(píng)估和應(yīng)用】：
最初人們都是通過(guò)化學(xué)藥物或者射線照射親本來(lái)獲得遺傳性白內(nèi)障動(dòng)物 模型，其缺點(diǎn)也是顯而易見(jiàn)的。除工作量大、可控性和重復(fù)性差之外，篩選出來(lái)的動(dòng)物要搞清其主要變異位點(diǎn)還需繁瑣的實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證。同時(shí)得到的動(dòng)物常伴有其他器官發(fā)育異常。最近組織特異性基因敲除成為了可能，使得我們可以便捷地獲得大量轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。對(duì)敲除基因進(jìn)行分子生物學(xué)的分析聯(lián)合詳細(xì)的動(dòng)物表型分析使我們更好地理解了眼球發(fā)育的進(jìn)程和通路。需要強(qiáng)調(diào)的是，盡管這些方法得到的一些動(dòng)物白內(nèi)障發(fā)病較晚，類(lèi)似于老年性白內(nèi)障，但這些動(dòng)物在出生后不久而或胚胎期就存在一些白內(nèi)障前期改變，不同于老年白內(nèi)障的自發(fā)病病程。
參考文獻(xiàn)：
1.楊秀蘭，蘇玉虹，李文龍．遺傳性白內(nèi)障動(dòng)物模型的研究進(jìn)展．遺傳，2007,29(2): 137-144
2.余琛琳，蔡麗萍，徐晨，等．大鼠半乳糖性白內(nèi)障動(dòng)物模型制備方法的改良及其機(jī)制．中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志， 2010, 20 (10): 23-27
3.張玉風(fēng)，周健，路璐，等大鼠半乳糖性白內(nèi)障模型的表現(xiàn)和病理特征．中華實(shí)驗(yàn)眼科雜志，2011, 19(6):489-494
4.施新猷，顧為望．人類(lèi)疾病動(dòng)物模型．北京：人民衛(wèi)生出版社，2008
5.崔蓓，付清，柳林，等．紫外線輻射致大鼠白內(nèi)障模型的建立．國(guó)際眼科雜志，2009, 9 (5):836-838
6.Graw J. Mouse models of cataract. J Genet, 2009, 88 (4): 469-486
7.Lee MJ, Kim JY, Kim YJ, et al. Characteristics of ethylnitrosourea-induced cataracts. Curr Eye Res, 2009, 34 (5):360-368
8.Tripathi BJ, Tripathi RC, Borisuth NS, et al. Rodent models of congenital and hereditary cataract in man. Lens Eye Toxic Res, 1991, 8 (4):373-413
13.Xie B,Nakanishi S,Guo Q,et al. A novel middlewavelength opsin (M-opsin) null-mutation in the retinal cone dysfunction ral. Exp Eye Res,2010,91(1):26-33
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