注:以下所有樣本盡量新鮮!
1、血清樣本收集
① 無抗凝劑的紅頭管/普通EP管采集全血標本,全血樣品于室溫放置1小時或2-8℃過夜后于,3000-3500rpm,離心10-15分鐘,取上清于EP管中,收集血液的試管應為一次性的無熱原,無內毒素試管。
② 于-80℃保存運輸,中途應避免反復凍融。請勿晃動采血管,紅細胞易破碎,出現(xiàn)溶血,從而影響實驗結果。
2、血漿樣本收集
① 抗凝劑推薦使用EDTA鈉鹽(紫色采血管)采集全血標本,緩慢顛倒十次使血漿與抗凝劑充分混合,4℃靜置暫存靜置10-20分鐘,3000-3500rpm,離心10-15分鐘,取上清于EP管中,避免使用溶血,高血脂樣品。
② 于-80℃保存運輸,中途應避免反復凍融。請勿晃動采血管,紅細胞易破碎,出現(xiàn)溶血,從而影響實驗結果。
注:全血樣本未離心分離前禁止冰凍。
3、組織樣本收集
取新鮮組織樣本于凍存管中,迅速于液氮速凍后,轉移到-80℃保存或運輸。
如自行進行組織勻漿處理可按下述方法進行:
① 用預冷的生理鹽水沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果)與其他物質,稱重后剪碎。
② 將剪碎的組織與對應體積的勻漿介質(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9ml的PBS,制備成10%的勻漿液,具體體積可根據(jù)實驗需要適當調整),加入玻璃勻漿器中,于冰水浴條件下充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。
③ 最后將勻漿液于3000-3500rpm,離心10分鐘,取上清于EP管中,于-80℃保存運輸。
注:本方法為常規(guī)elisa試劑盒樣本處理方式,具體操作需按試劑盒說明書進行。
4、細胞收集
① 貼壁細胞用冷的PBS輕輕清洗,然后用胰蛋白酶消化,3000-3500rpm離心5分鐘后收集細胞;懸浮細胞可直接離心收集于EP管中,-80℃保存運輸。
5、細胞培養(yǎng)上清或其他動物體液
① 收集液體后于2-8℃,3000-3500rpm離心20分鐘,除去雜質及細胞碎片。取上清于EP管中,于-80℃保存運輸。
注意:
(1)其他樣本如尿液、胸腹水、腦脊液等也可檢測,建議采樣前與里來生物聯(lián)系,樣品的取材直接影響到您的實驗結果;
(2)收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定;
(3)因特殊原因需周期收集的標本,需將標本及時分裝后置于-80℃下長期或-20℃短期保存,避免反復凍融;
(4)-20℃可保存1個月,-80℃可保存6個月;
(5)標本使用前應緩慢均衡至室溫,不應加熱使之溶解;
(6)標本溶血會影響最后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。